劲骨胶囊鉴别及加水10mL溶解

（3）茚三酮显色法

取胶囊内容物200mg，劲骨胶囊鉴别及加水10mL溶解，功效过滤，成分取滤液5mL，盐酸于10mL具塞试管中，氨基作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品25mg，葡萄于10mL具塞试管中，糖含加水5mL溶解，量测制成对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg，劲骨胶囊鉴别及与样品同法制成阴性样品溶液的功效方法实验后观察，样品和对照品溶液为蓝紫色，成分阴性样品则无此反应，盐酸如图4所示。氨基

（4）薄层色谱法

取胶囊内容物50mg于分液漏斗中，葡萄加水10mL溶解，糖含加石油醚（30～60⁰C）20mL，振摇，静置分层，取下层液过滤，作为样品溶液；取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg，加水5mL溶解，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物50mg，与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，整个薄层色谱图层次分明，斑点清晰可见，样品和对照品只有一个斑点，位置在一条线上，R_f值一致，均显相同深红色斑点，阴性样品不显色，如图5所示。

该项研究与现有的国家药品标准GB/T20365-2006在样品提取、展开剂和显色方式上作了较大改进。因为药品是化学纯品，可以用水直接提取，展开剂为甲醇-浓氨水=（9:1，V:V），展开，晾干后喷以茚三酮显色剂。而劲骨胶囊是多种原料混合物，若按此法分离显色效果较差，背景棕黑色，斑点模糊不清。本法样品先用石油醚脱脂和除去脂溶性色素，以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水=（4:1:1:2，V:V:V:V）为展开剂，茚三酮显色剂溶解在展开剂中，展开与显色同时进行，远比喷洒显色要均匀，便于操作，背景白色，斑点深红色，反差大，图谱更清晰。

这些鉴别方法都从不同角度证明样品中真实存在盐酸氨基葡萄糖。同时所有方法的阴性样品都不显色，说明这些方法专属性强。

2、薄层色谱法鉴别白芍提取物

取胶囊内容物2g，加乙醇40mL，超声提取20min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加水20mL溶解，加水饱和正丁醇溶液振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为样品溶液；取白芍对照提取物1g，加乙醇30mL，与样品同法制成对照提取物溶液；取白芍对照药材0.5g，加乙醇10mL，与样品同法制成对照药材溶液；取芍药苷对照品适量，加乙醇制成1mg/mL溶液，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含白芍及白芍提取物胶囊内容物2g，与样品同法制成阴性样品溶液。的方法实验后观察，样品色谱中，在与白芍对照提取物，白芍对照药材，芍药苷对照品相应位置上显相同颜色的蓝紫色斑点，Rf值一致，阴性样品不显色，如图6所示。

国内外关于白芍及白芍提取物报道较少，Yan等用HPLC、LC-MS等方法测定白芍中芍药苷等化学成分，而不是白芍提取物的鉴别。中国药典一部有鉴别白芍单味药材的薄层色谱法，实验中仅设计芍药苷1个对照物。但由于本研究样品是多种原料混合物，之间相互干扰，如直接应用，无法分离。参考相关文献，采用水饱和正丁醇萃取，除去样品中干扰物质，可使芍药苷得到了很好分离。结果显示，样品与对照组的芍药苷斑点位置、颜色均保持一致，这比单一对照品鉴别方法更加可信。

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